[1]CHO细胞是什么?
CHO细胞是Chinese hamster ovary cell的缩写,1957年从中国地鼠卵巢细胞得到,该细胞是上皮样细胞,通常贴壁生长、也可悬浮生长。CHO细胞被广泛地用来表达重组DNA的蛋白
为什么选择CHO细胞进行表达重组DNA的蛋白?
原因总结如下几点:
(1)具有准确的转录后修饰功能,表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子;
(2)既可贴壁生长,又可以悬浮培养,且有较高的耐受剪切力和渗透压能力;它是极少数能够简单而有效地进行高密度动物细胞悬浮培养的细胞系之一;
(3)具有重组基因的高效扩增和表达能力,外源蛋白的整合稳定;
(4)具有产物胞外分泌功能,并且很少分泌自身的内源蛋白,便于下游产物分离纯化;(表达的目的蛋白可由细胞内运输到细胞外,并且CHO 细胞只表达少量的内源蛋白,有利于目的蛋白的提取)
(5)能以悬浮培养方式或在无血清培养基中达到高密度培养。且培养体积能达到1000L以上,可以大规模生产。产品得率非常高;
(6)抗代谢压力能力较强,淋巴细胞则较难进行产业规模的培养。
缺点?详见https://wenku.baidu.com/view/7bd9c1d1d15abe23482f4d67.html
CHO细胞的历史(http://www.sohu.com/a/298754495_682259)
1919年,北京协和医学院的胡正祥教授(注:胡正祥,1896年生,著名病理学家。1921年毕业于美国哈佛医学院,后在美国麻省总医院继续学习病理学5年。回国后历任北京协和医学院副院长,病理系教授、系主任等职,在病理学研究中颇有建树。)最早在北京使用中国地仓鼠研究肺炎球菌,由于条件所限,试验小白鼠很难获得,正好北京周围的中国地仓鼠众多,中国地仓鼠便成为了很好的试验研究工具。后来在北京协和医学院工作的美国科学家Jocelyn Smyly和Charles Young发现中国地仓鼠很容易感染寄生虫利什曼原虫从而引发Black fever黑热病,之后中国的医学科研人员都使用中国地仓鼠来研究各种传染性疾病,中国仓鼠成为了流行病学研究的有力工具。
1948年12月,南京解放前的一个黑暗的深夜,美国洛克菲勒基金会国际医疗部(Rockefeller Foundation's International Health Division)医生Dr. Robert Briggs Watson冒着生命危险,带着一箱20个北京胡正祥教授赠与的、用来继续研究在亚洲肆虐的疟疾的中国地仓鼠,躲过交战区,驱车到上海机场。尽管寒冷的雨滴强烈拍打着玻璃,泥石流随时可以阻断道路,最终Watson还是成功地登上了Pan Am航班离开了中国,将这批中国地仓鼠运给纽约的试验动物专家Victor Schwentker。谁也没有想到,很多年后,伴随他的20只中国地仓鼠,会成为当代药物生产工业的关键"钥匙"。
美国科学家后来完成了中国地仓鼠的繁育,使其成为科学研究的有力工具。University of Colorado Medical Center的Dr.Theodore T. Puck和他的下属同事Fa-Ten Kao在1957年从波士顿癌症研究中心的Georege Yerganian博士的实验室获得了一个雌性中国地仓鼠,并成功分离了CHO细胞株,由于该细胞快速悬浮生长和高蛋白表达的特性,CHO细胞开始在科研和企业获得普遍的应用。"
1984年,Genentech公司首次实现重组中国仓鼠卵巢细胞表达组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)并于1987年成功获批上市,标志着哺乳动物细胞表达系统生产蛋白药物的一个标志性事件。随后,许多外源蛋白基因相继被转染到哺乳动物细胞,一些有价值的蛋白不断实现表达,包括凝血因子、促红细胞生成素(EPO)、免疫球蛋白、尿激酶、乙肝表面抗原(HBsAg)和单克隆抗体等,极大地促进了生物药工业的发展。同时,随着CHO细胞在实验室的普及,科学家成功分离出的不同亚型的CHO细胞株,比如CHO-S, , CHO DXB11, CHO DG44,CHO-M以及近年来受到持续关注的GS基因敲除的CHO细胞(如Merck/Sigma Aldrich公司的CHOZN, Lonza的CHO GS Xceed, Horizon公司用rAAV技术敲除的CHO细胞)。
CHO细胞主要的供货商有哪些?
如何选择合适的供应商?
如何对细胞供应商进行审计?审计依据?
待续